### 细胞介绍

HepG2细胞系（[HEPG2]）是一种表现出上皮样形态的细胞，源自一名15岁阿根廷男性肝细胞癌患者。这种细胞能分泌多种血浆蛋白，包括清蛋白、α2-巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原和铁传递蛋白等。HepG2细胞系为Wistar研究所所获，是理想的转染宿主，具有显著的生物学研究价值。其表达标志物包括胰岛素和胰岛素样生长因子II（IGFII）。HepG2细胞通常表现为贴壁生长，初始会在培养瓶壁紧密附着形成小岛状结构，随后可能出现多层堆积或悬浮状态。这一细胞系因其良好的贴壁特性，被广泛用于肝细胞功能与病毒模型的研究。

### 传代培养

1. 细胞为贴壁生长，当细胞有脱落现象时，需将培养液转移至无菌离心管中，离心（125g，3-5分钟），收集悬浮细胞。轻轻去除培养基后，将贴壁细胞消化收集并混匀接种。

2. 使用PBS洗涤贴壁细胞1-2次，每次3-5ml，随后将1ml胰酶（0.25%含EDTA）加入细胞瓶中，轻轻摇匀并置于培养箱中消化。1-3分钟后，可观察细胞变化，若细胞开始脱落，大约70-80%细胞漂浮，立即加入5ml完全培养基中和，轻柔吹打细胞以促进解离。

3. 将细胞悬液转移到无菌离心管中进行计数，调整细胞密度为每毫升0.6-2×10⁵，再转移至培养瓶中，静置于培养箱中。建议在T25培养瓶中添加5-7ml完全培养基，并在2-3天后进行换液。

### 细胞冻存

1. 当细胞密度达到80%且活细胞比例超过95%时，参照以上步骤消化细胞并收集沉淀以进行冻存。

2. 将细胞沉淀用4°C冻存液重悬，建议每瓶T25细胞冻存一管（1ml/管），之后将冻管置于-80℃超低温冰箱中过夜。在转移至液氮罐之前，需在-80℃保存至少一天。

### 细胞复苏

1. 将从液氮中取出的冻存细胞放置于干冰中转移至细胞房，提前备好完全培养基和离心管等材料。

2. 冻管细胞在37°C水浴中快速解冻（约1-2分钟），为了避免污染，保持冻管瓶盖在水面之上。解冻后立即用70%乙醇对冻管外壁进行消毒。

3. 将内容物转移至含3-6ml完全培养基的离心管中，缓慢混匀，离心1000-1200rpm（125g，3分钟）去除培养基。随后用PBS重悬细胞，计数并调整细胞密度至0.6-2×10⁵，再转移至培养瓶中。

### 常见问题

1. 如果培养过程中细胞碎片较多，应注意细胞本身的特性及培养条件。适当的培养环境可以降低细胞内颗粒的提高。

2. 空泡现象在HepG2细胞中常见，不影响细胞生长。

3. 如果细胞生长缓慢，建议适当增加血清比例（不超过20%），调整接种密度。

4. 细胞聚团或不贴壁的情况通常与血清品牌和培养基的pH有关，优质的低内毒素胎牛血清有助于细胞良好贴壁。

5. 漂浮细胞的存在属于正常现象，不宜轻易丢弃。可利用台盼蓝检测活性，必要时进行离心重悬接种。

6. 观察到圆形细胞附着在贴壁细胞上是正常现象，通常不需特殊处理。

### 注意事项

HepG2细胞对培养条件的要求较高，特别是pH值和血清质量。建议使用高质量、低内毒素的胎牛血清，以确保细胞的健康生长。此外，细胞在复苏后的状态可能会略显不典型，但经过几次传代后将更加稳定。

### 发表过的文献

截至2024年，与中乔新舟相关的HepG2细胞研究已发表文献72篇，总影响因子达到467.07。以下为几篇代表性文献：

1. 论文题目：Dienediamine: A safe surrogate for the herbicide paraquat，期刊：Molecular Plant，影响因子：2.75

2. 论文题目：Photodegradation of carbon dots causes cytotoxicity，期刊：Nature Communications，影响因子：14.919

3. 论文题目：Ubiquitin-specific protease 1 facilitates hepatocellular carcinoma progression by modulating mitochondrial fission and metabolic reprogramming via cyclin-dependent kinase 5 stabilization，期刊：Cell Death and Differentiation，影响因子：13.74

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