金年会金字招牌诚信至上的人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1%丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S

贴壁传代方法：首次建议1:2的传代比例。

备注：建议使用无菌离心管收集培养基，用于过渡对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应在良好状态下灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。

首先，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台内严格进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃，5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。

建议使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存，不同倍数（最好40x、100x、200x各一张）进行存档。前三天的照片将成为重要的售后依据，若未提供照片则默认收到状态良好。

传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自行配制的完全培养基，以便进行对比培养，换液后请松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管中，留5ml培养基，放入37℃，5% CO2孵箱继续培养；若细胞密度超80%，则可进行传代培养，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用无钙、镁PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，并置于37℃培养箱中消化1-2分钟后，观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃，5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，待细胞回缩变圆后迅速加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使之脱落，之后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清液后，加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 直接将冻存细胞放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，需在-80℃保存24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，再放于37℃，5% CO2细胞培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞可能在运输过程中易发生脱落，属正常现象。当细胞脱离较多时，可将培养瓶中的液体收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清用于过渡培养（后期对比培养）。沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打并重悬，消化1-2分钟后，以5ml完全培养基终止反应，再进行离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新培养基至5-8ml/瓶，最后放入培养箱中。

五、售后条款

1. 可重发的情况

若细胞出现以下问题，符合条件的可进行重发：

1. 细胞在运输途中遇到问题，例如丢失、瓶身破损、培养液漏液等。
2. 细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果以核实。
3. 常温发货细胞在静置24小时后或干冰发货细胞在复苏24小时后，若大部分细胞未存活需提供清晰照片。
4. 对于干冰发货细胞复苏24小时后或常温发货细胞未开封静置4小时出现污染的情况。
5. 细胞活性问题，在收到产品7天内需提供真实实验结果。
6. 在收到细胞当天及后2-3天拍照，若3天内未告知视为产品合格，4-7天内如出现问题需提供相关照片及详细操作步骤。

2. 不予重发的情况

以下情况将不予重发：

1. 客户造成的细胞污染。
2. 客户不当操作导致的细胞状态不佳。
3. 非本库推荐的培养体系导致细胞活性问题。
4. 未提供细胞培养前3天的照片。
5. 细胞培养时经历其它处理的情况。
6. 收到细胞2天内未告知的情况。
7. 根据具体情况而定。

金年会金字招牌诚信至上致力于提供高质量的细胞培养服务，确保您的实验顺利进行。