金年会金字招牌诚信至上的抗体检测通用ELISA操作流程（效价测定）分为几个步骤。以下是详细介绍：

1. 包被步骤

1) 准备包被缓冲液，并配制1-10μg/ml的抗原溶液（建议现配现用）。

2) 向高结合力的ELISA板（货号80112）每个孔中加入100μl抗原溶液，随后用封板膜覆盖，置于室温轻摇孵育2-6小时，或在4℃过夜孵育。

3) 吸弃孔内溶液，并使用洗涤缓冲液清洗板子2次。

2. 封闭步骤

1) 用封闭缓冲液母液配制工作液，并在每个孔中加入300μl，室温轻摇孵育2-6小时，或在4℃过夜。

2) 吸弃封闭液后，用吸水纸轻轻拍干，随后可以立即使用板子或将其密封保存在4℃备用。

3. 抗体效价检测

1) 使用抗体稀释液对应免疫前和免疫后血清进行梯度稀释（1:100至1:100,000），每孔加入100μl。覆以封板膜，室温轻摇孵育30分钟。

2) 吸弃液体，并用洗涤缓冲液将板子洗涤5次（每次200-300μl，确保洗涤充分，以免产生高背景）。

3) 配制HRP标记抗兔二抗（稀释比例为1:5,000-1:20,000）用抗体稀释液，每孔加入100μl（注意稀释不当可能导致显色过弱或背景过高）。

4) 覆以封板膜，室温轻摇孵育30分钟。

5) 吸弃液体后，再次洗涤5次并拍干。

6) 每孔中添加100μl的现成TMB底物溶液。

7) 覆以封板膜，室温轻摇孵育，直到阳性孔显现蓝色（最长不超过15分钟）。

8) 每孔中加入100μl终止液，蓝色液体将转变为黄色。

9) 在450nm波长下读取吸光度。

注意事项

1) 本ELISA流程适用于针对纯化抗原（如蛋白质或多肽）产生的抗体进行定性检测，无法用于血清或其他体液中抗体浓度的定量测定。

2) 本流程默认一抗来自兔源，若使用其他宿主动物，则需选择相应的二抗。

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