在之前的干货分享中，我们探讨了WesternBlot实验中蛋白浓度的四种测定方法。本篇将重点讨论样本制备中常见的几个问题，并提供有效的解决方案。

问题1：蛋白浓度偏低

造成蛋白浓度低的原因可能有多种，主要包括以下几点：

1. 细胞或组织量不足。
2. 样本与裂解液的比例不合适。
3. 样本未充分裂解。
4. 所选择的蛋白浓度测定方法不适合。

解决方案：

1. 增加样本量。
2. 根据样本量调整裂解液的量，例如100万细胞或20mg组织时，加入100-200μL裂解液。
3. 确保裂解时间充足，通常在低温下进行10-30分钟的裂解，组织样本需借助物理破碎，细胞样本可进行吹打混匀。
4. 选择合适的蛋白浓度测定方法。

问题2：出现透明胶状物

胶状物质通常是由于基因组复合物释放导致的。

解决方案：

1. 适当超声或使用1mL注射器反复抽吸，以打断基因组DNA，从而消除粘稠感。
2. 在添加Loading buffer并进行煮沸变性时，适当延长煮沸时间。充分的加热不仅能释放结合在基因组DNA上的蛋白，还能使基因组DNA部分断裂，从而减少粘稠感。
3. 在裂解液中添加广谱核酸酶，以帮助处理。

问题3：上清层漂浮一层油脂

样本中可能富含脂肪成分。

解决方案：

1. 裂解后将样本在低温下静置，吸出漂浮的油脂。
2. 若吸取后效果仍不理想，可以尝试使用二氧化硅进行吸附。

通过以上方法的实施，可以有效解决WesternBlot实验样本制备中常见的问题，确保实验结果的准确性和可靠性。我们坚信，金年会金字招牌诚信至上的理念将在生物医疗领域的各项工作中不断得到落实与体现。