在生物医疗研究中,过氧化氢酶的检测对于了解细胞内氧化还原状态及其健康状态具有重要意义。我们提供了一套完善的方案,以准确测定样本中的过氧化氢酶活性。以下是使用标准甲醛的实验设置。
实验材料清单
以下是各组实验管的组成及最终浓度计算:
- 标准甲醛(µL)
- 1×样品稀释液(µL)
- 最终浓度(µM 甲醛)
具体配比为:1499, 622, 1099, 0533, 0970, 1546, 0940, 3059, 0910, 4561, 2088, 0607, 1508, 5075。
注意:最终的甲醛浓度是指在170µL反应体系中的终浓度。
实验设置方案
实验孔的配置如下:
- 试剂空白孔(µL):100
- 标准孔(µL):100
- 测定孔(µL):100
- 阳性对照孔(µL):100
各组具体试剂量如下:
- 1×检测缓冲液: 100 µL
- 甲醇: 30 µL
- 1×样品稀释液: 20 µL
- 标准液: 20 µL
- 样本: 20 µL
- 稀释过氧化氢酶(控制): 20 µL
- 稀释过氧化氢: 20 µL
将各组分充分混匀后,在室温下孵育20分钟。
后处理步骤
接着,加入以下试剂并充分混匀:
- 氢氧化钾: 30 µL
- 显色剂: 30 µL
再次充分混匀,室温孵育10分钟。再添加次氯酸钾作为酶的激活剂:
- 过碘酸钾: 10 µL
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